国产免费一区二区三区香蕉精_国产一级毛片国语版_57pao视频国产在线观看_国产精品视频二区不卡

歡迎來到南京億迅生物科技有限公司

技術文章/ Technical Articles

我的位置:首頁  >  技術文章  >  酶聯免疫吸(xi)附法(ELISA)原理與分類

酶聯免疫吸附法(ELISA)原理與分類

更新時間:2024-06-25      瀏覽次數:142

原理(li):

酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)法,又(you)名酶(mei)(mei)(mei)聯免(mian)疫(yi)吸附法(ELISA),利用(yong)酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)記抗(kang)(kang)(kang)原或(huo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)以檢(jian)(jian)(jian)測相應抗(kang)(kang)(kang)原或(huo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)一種免(mian)疫(yi)學標(biao)(biao)(biao)(biao)記技術。其基(ji)本(ben)原理是(shi)使抗(kang)(kang)(kang)原或(huo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)結合到某(mou)種固相載體(ti)(ti)(ti)(ti)表(biao)面(mian),并保持其免(mian)疫(yi)活(huo)性(xing)(xing),而相對(dui)應的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)原與某(mou)種酶(mei)(mei)(mei)連接成酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)原,酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)原既保留(liu)了免(mian)疫(yi)活(huo)性(xing)(xing)可(ke)以與固相載體(ti)(ti)(ti)(ti)表(biao)面(mian)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)原或(huo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)結合,又(you)保留(liu)了酶(mei)(mei)(mei)活(huo)性(xing)(xing)能夠以酶(mei)(mei)(mei)為檢(jian)(jian)(jian)測信號,加入酶(mei)(mei)(mei)反應的(de)(de)(de)(de)底(di)物(wu)后,底(di)物(wu)被酶(mei)(mei)(mei)催化為有色產物(wu),產物(wu)的(de)(de)(de)(de)量與受(shou)檢(jian)(jian)(jian)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)原的(de)(de)(de)(de)量成比例(li),故可(ke)根(gen)據顏色深淺來定性(xing)(xing)或(huo)定量分析(xi)。酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)法具有靈敏性(xing)(xing)強,特異性(xing)(xing)高(gao),重(zhong)復性(xing)(xing)好,檢(jian)(jian)(jian)測速度快的(de)(de)(de)(de)特點,尤(you)其適用(yong)于大批量樣本(ben)檢(jian)(jian)(jian)測,是(shi)國際(ji)認可(ke)的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)(biao)準化診斷方法。

image.png

基本操作步驟:

包(bao)被—封閉—加樣—孵育(yu)一抗(kang)—洗(xi)滌—孵育(yu)二抗(kang)—洗(xi)滌—顯色—終止—讀(du)數


分類:

依據(ju)檢測目的(de)不同,酶標抗體(ti)法(fa)有(you)間接法(fa),雙抗體(ti)夾心(xin)法(fa),競爭(zheng)法(fa)和抗體(ti)捕獲法(fa)等。


1.間接法

主(zhu)要是利(li)用(yong)酶(mei)標記的抗抗體(ti)檢(jian)測已(yi)與固相結合(he)的受檢(jian)抗體(ti),是檢(jian)測抗體(ti)常(chang)用的方(fang)法。將特異(yi)性抗(kang)(kang)原與(yu)(yu)固(gu)相載(zai)體(ti)(ti)(ti)連(lian)接,形成固(gu)相抗(kang)(kang)原,洗(xi)(xi)滌(di)除去未結(jie)合的抗(kang)(kang)原及(ji)雜質。加(jia)入稀釋的受(shou)檢樣品(如(ru)血清(qing)),樣品中特異(yi)性抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)與(yu)(yu)抗(kang)(kang)原結(jie)合,形成固(gu)相抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)復合物(wu)。經洗(xi)(xi)滌(di)后(hou)固(gu)相載(zai)體(ti)(ti)(ti)上(shang)(shang)只(zhi)留下特異(yi)性抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)。其他免疫球蛋白及(ji)雜質由于不能與(yu)(yu)固(gu)相抗(kang)(kang)原結(jie)合,在洗(xi)(xi)滌(di)過程中被洗(xi)(xi)去。加(jia)入酶標抗(kang)(kang)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)與(yu)(yu)固(gu)相復合物(wu)中的抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)結(jie)合,從而使該(gai)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)間接地標記上(shang)(shang)酶。洗(xi)(xi)滌(di)后(hou)固(gu)相載(zai)體(ti)(ti)(ti)上(shang)(shang)的酶量(liang)就代表特異(yi)性抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)的量(liang)。最后(hou)加(jia)底物(wu)顯色,依據顏色深度代表標本中受(shou)檢抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)的量(liang)。

2.雙抗體(ti)夾心(xin)法

檢測抗原常用的(de)(de)方法。將特(te)異性(xing)(xing)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)與(yu)固(gu)(gu)(gu)相(xiang)(xiang)載體(ti)(ti)連接,形(xing)成(cheng)固(gu)(gu)(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),洗(xi)滌除去未結(jie)(jie)(jie)合(he)的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)及雜質。加(jia)受檢標本,使(shi)之與(yu)固(gu)(gu)(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)接觸反(fan)應(ying)一(yi)段時間,讓(rang)標本中(zhong)(zhong)的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)與(yu)固(gu)(gu)(gu)相(xiang)(xiang)載體(ti)(ti)上(shang)的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)結(jie)(jie)(jie)合(he),形(xing)成(cheng)固(gu)(gu)(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)復(fu)合(he)物(wu)(wu)。洗(xi)滌除去其(qi)他未結(jie)(jie)(jie)合(he)的(de)(de)物(wu)(wu)質。加(jia)酶標抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)使(shi)固(gu)(gu)(gu)相(xiang)(xiang)免疫復(fu)合(he)物(wu)(wu)上(shang)的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)與(yu)酶標抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)結(jie)(jie)(jie)合(he),洗(xi)滌未結(jie)(jie)(jie)合(he)的(de)(de)酶標抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),此時固(gu)(gu)(gu)相(xiang)(xiang)載體(ti)(ti)上(shang)帶(dai)有(you)(you)的(de)(de)酶量與(yu)標本中(zhong)(zhong)受檢物(wu)(wu)質的(de)(de)量正相(xiang)(xiang)關。夾心(xin)式復(fu)合(he)物(wu)(wu)中(zhong)(zhong)的(de)(de)酶催化底(di)物(wu)(wu)成(cheng)為(wei)有(you)(you)色產物(wu)(wu)。根據顏色反(fan)應(ying)的(de)(de)程度進行該抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)定性(xing)(xing)或定量。

3.競爭法(fa)

可(ke)用于(yu)測定抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan),也可(ke)用于(yu)測定抗(kang)(kang)體(ti)。以測定抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)為例(li),受(shou)檢(jian)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)和(he)酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)競爭與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)體(ti)結合(he)(he)(he)(he),因(yin)此結合(he)(he)(he)(he)于(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)的(de)(de)酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)量(liang)(liang)(liang)(liang)與(yu)(yu)受(shou)檢(jian)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)量(liang)(liang)(liang)(liang)呈反(fan)比。將特異(yi)抗(kang)(kang)體(ti)與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)載(zai)體(ti)連接,形成固(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)體(ti),洗滌后加入受(shou)檢(jian)標(biao)(biao)(biao)本和(he)一(yi)定量(liang)(liang)(liang)(liang)酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)混合(he)(he)(he)(he)溶液,使(shi)之(zhi)與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)體(ti)反(fan)應。如受(shou)檢(jian)標(biao)(biao)(biao)本中無抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan),則酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)能順利(li)地(di)與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)體(ti)結合(he)(he)(he)(he)。如受(shou)檢(jian)標(biao)(biao)(biao)本中含(han)有抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan),則與(yu)(yu)酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)以同樣的(de)(de)機會與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)體(ti)結合(he)(he)(he)(he),競爭性地(di)占(zhan)去了酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)載(zai)體(ti)結合(he)(he)(he)(he)的(de)(de)機會,使(shi)酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)載(zai)體(ti)的(de)(de)結合(he)(he)(he)(he)量(liang)(liang)(liang)(liang)減少。參考(kao)管(guan)中只加酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan),孵(fu)育后酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)與(yu)(yu)固(gu)相(xiang)(xiang)抗(kang)(kang)體(ti)的(de)(de)結合(he)(he)(he)(he)可(ke)達最充分的(de)(de)量(liang)(liang)(liang)(liang)。洗滌后加底物顯(xian)色(se)(se),參考(kao)管(guan)中由于(yu)結合(he)(he)(he)(he)的(de)(de)酶標(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)最多(duo),故顏色(se)(se)最深。參考(kao)管(guan)顏色(se)(se)深度與(yu)(yu)待(dai)測管(guan)顏色(se)(se)深度之(zhi)差代表(biao)受(shou)檢(jian)標(biao)(biao)(biao)本抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)量(liang)(liang)(liang)(liang)。待(dai)測管(guan)顏色(se)(se)越(yue)(yue)淺,表(biao)示標(biao)(biao)(biao)本中抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)含(han)量(liang)(liang)(liang)(liang)越(yue)(yue)多(duo)。

4.抗體捕獲法(fa)

血清中針對某些抗(kang)原的特(te)(te)異(yi)性(xing)IgM常和(he)特(te)(te)異(yi)性(xing)IgG同時存在(zai),后(hou)(hou)(hou)者會干(gan)擾IgM抗(kang)體(ti)(ti)的測定(ding)(ding)(ding)。因此測定(ding)(ding)(ding)IgM抗(kang)體(ti)(ti)多用捕獲法(fa)。先將所有血清IgM(包括異(yi)性(xing)IgM和(he)非特(te)(te)異(yi)性(xing)IgM)固(gu)定(ding)(ding)(ding)在(zai)固(gu)相上,去除IgG后(hou)(hou)(hou)再測定(ding)(ding)(ding)特(te)(te)異(yi)性(xing)IgM。將抗(kang)IgM抗(kang)體(ti)(ti)連接在(zai)固(gu)相載(zai)體(ti)(ti)上,洗滌后(hou)(hou)(hou)加(jia)入(ru)(ru)稀釋的血清標本,洗滌后(hou)(hou)(hou)加(jia)入(ru)(ru)特(te)(te)異(yi)性(xing)抗(kang)原,洗滌后(hou)(hou)(hou)再加(jia)入(ru)(ru)酶標抗(kang)體(ti)(ti),最(zui)后(hou)(hou)(hou)洗滌加(jia)底(di)物顯色(se)。


南京億(yi)迅生(sheng)物科(ke)技有(you)限公司出品的(de)各類ELISA試劑(ji)盒(he),產品質量穩定,價格實惠,在國(guo)內各科(ke)研院所和(he)高校擁有(you)良(liang)好的(de)品譽(yu)。該類產品有(you):豬α干擾素(IFI-α)ELISA試劑盒,小鼠白介素2(IL-2) ELISA試劑盒,肌鈣蛋白(CTnI)ELISA試劑盒,雞二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒,小鼠腫瘤壞死因子 α(TNF-α)ELISA 檢測試(shi)劑盒等。歡迎各界用戶來電或留言垂詢,無論您是親自下單,還是咨詢技術問題,我們將為您真誠服務。

拿起手機掃(sao)一掃(sao)
地址:小行路158號
郵箱:
聯系人:聞經理

Copyright © 2024南京億迅生物科(ke)技(ji)有限公司(si) All Rights Reserved    備(bei)案號:

技術支持:        sitemap.xml

服(fu)務熱線

掃碼添加微信

返回頂部





var _hmt = _hmt || []; (function() { var hm = document.createElement("script"); hm.src = "https://hm.baidu.com/hm.js?63a5e6bfadb91afc92f810632c857c25"; var s = document.getElementsByTagName("script")[0]; s.parentNode.insertBefore(hm, s); })();